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乙肝-DNA与丙肝RNA检测:揭开肝炎病毒复制的神秘面纱

2023-05-25 20:31 河南广播电视台安全健康直通车

在病毒性肝炎的诊断与治疗领域,乙肝 -DNA 与丙肝 RNA 检测扮演着极为关键的角色。它们犹如一把把精准的钥匙,帮助我们深入了解乙肝病毒(HBV)与丙肝病毒(HCV)在体内的复制情况,从而为疾病的诊疗提供重要依据,守护患者的肝脏健康。

一、乙肝 -DNA 检测

  1. 乙肝病毒概述

乙肝病毒是一种部分双链环状 DNA 病毒,其感染人体后可引发乙型肝炎。乙肝病毒具有独特的生命周期,它主要感染肝细胞,并利用肝细胞的各种生物机制进行自身的复制与传播。乙肝病毒的基因组包含多个开放阅读框,分别编码不同的病毒蛋白,这些蛋白在病毒的组装、感染性以及免疫逃逸等方面都发挥着关键作用。

  1. 乙肝 -DNA 检测的意义
  • 评估病毒复制活跃度:乙肝 -DNA 检测能够直接测定血液中乙肝病毒的核酸含量。病毒载量的高低与病毒复制的活跃程度密切相关。高病毒载量通常意味着乙肝病毒在体内大量复制,这对于判断疾病的进展风险具有重要意义。例如,在慢性乙肝患者中,如果乙肝 -DNA 持续处于高水平,那么患者发生肝硬化、肝癌等严重并发症的概率相对较高。
  • 指导抗病毒治疗:是决定是否启动抗病毒治疗以及监测治疗效果的核心指标。对于乙肝 e 抗原(HBeAg)阳性的慢性乙肝患者,当乙肝 -DNA ≥ 20,000 IU/mL,且谷丙转氨酶(ALT)持续升高时,一般建议开始抗病毒治疗;对于 HBeAg 阴性的慢性乙肝患者,乙肝 -DNA ≥ 2,000 IU/mL 且 ALT 升高也常是启动抗病毒治疗的重要依据。在抗病毒治疗过程中,定期检测乙肝 -DNA 可以观察病毒载量的下降情况,判断治疗是否有效。如果治疗后病毒载量持续下降直至检测不到,说明抗病毒药物发挥了作用,患者的病情得到了有效控制;反之,如果病毒载量没有明显变化或者出现反弹,则可能提示治疗失败或病毒产生了耐药性,需要调整治疗方案。
  1. 检测方法
  • 实时荧光定量 PCR 技术:这是目前临床上应用最为广泛的乙肝 -DNA 检测方法。该技术利用特异性引物和 Taq 酶对乙肝 -DNA 进行扩增,同时在反应体系中加入荧光探针。随着 PCR 反应的进行,荧光信号强度与扩增产物的数量成正比,通过实时监测荧光信号的变化,就可以准确地定量检测出乙肝 -DNA 的拷贝数。这种方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,能够检测出极低水平的乙肝病毒,为临床诊断和治疗提供了可靠的数据支持。
  • 数字 PCR 技术:近年来逐渐兴起的一种新型检测技术。它将样本进行微滴化处理,使每个微滴中至多含有一个 DNA 分子,然后对每个微滴分别进行 PCR 扩增和检测。通过统计含有扩增产物的微滴数量,可以实现对乙肝 -DNA 的绝对定量。数字 PCR 技术在检测低病毒载量样本时具有更高的准确性和灵敏度,尤其适用于监测抗病毒治疗后低水平病毒残留的情况,对于评估治疗的彻底性和预测疾病复发具有重要价值。

二、丙肝 RNA 检测

  1. 丙肝病毒概述

丙肝病毒是一种单股正链 RNA 病毒,其基因组结构相对简单,但变异性极强。丙肝病毒主要通过血液传播,感染人体后可引起丙型肝炎,大部分患者在急性期症状不明显,容易转为慢性感染。慢性丙肝如果不及时治疗,可逐渐发展为肝硬化、肝癌等终末期肝病。

  1. 丙肝 RNA 检测的意义
  • 确诊丙肝感染:由于丙肝病毒抗体检测存在一定的假阳性和假阴性情况,丙肝 RNA 检测成为确诊丙肝感染的“金标准”。在抗体检测结果不确定或者怀疑有近期感染时,检测丙肝 RNA 可以明确是否存在病毒感染,避免漏诊和误诊。
  • 评估疾病预后与治疗决策:丙肝 RNA 载量的高低与丙肝疾病的进展速度和严重程度有一定关联。高病毒载量可能预示着更快速的肝纤维化进程。同时,在决定丙肝治疗方案时,丙肝 RNA 检测结果至关重要。目前的抗病毒治疗方案主要针对丙肝 RNA 进行靶向治疗,通过检测治疗前的病毒载量,可以预测治疗效果和疗程。例如,对于一些基因 1 型丙肝患者,如果丙肝 RNA 水平较高,可能需要联合使用多种抗病毒药物,且治疗疗程相对较长。
  • 监测治疗效果:在丙肝抗病毒治疗过程中,定期检测丙肝 RNA 是判断治疗是否成功的关键指标。一般在治疗 4 周、12 周、24 周等时间点进行检测。如果在治疗 12 周时丙肝 RNA 检测不到,称为快速病毒学应答(RVR),这是治疗效果良好的重要标志,患者获得持续病毒学应答(SVR,即治疗结束后 12 周或 24 周丙肝 RNA 仍检测不到)的概率较高;如果治疗 12 周时丙肝 RNA 仍可检测到,但较治疗前明显下降,称为部分病毒学应答(PPV),可能需要调整治疗方案;如果治疗 12 周时丙肝 RNA 下降幅度小于 1 log10,称为无病毒学应答(NVR),则需要重新评估治疗策略。
  1. 检测方法
  • 逆转录 PCR(RT-PCR)技术:是丙肝 RNA 检测的常用方法之一。由于丙肝病毒是 RNA 病毒,首先需要利用逆转录酶将 RNA 逆转录为 cDNA,然后再进行 PCR 扩增和检测。这种方法可以检测出低至 10 - 100 IU/mL 的丙肝 RNA,能够满足临床诊断和治疗监测的需求。不过,RT-PCR 技术对实验操作要求较高,容易受到污染导致假阳性结果。
  • 转录介导的扩增(TMA)技术:该技术利用 RNA 聚合酶和逆转录酶在恒温条件下对丙肝 RNA 进行扩增。TMA 技术具有较高的灵敏度和特异性,且操作相对简便,能够快速得到检测结果。它可以检测出极低水平的丙肝 RNA,对于早期诊断丙肝感染以及监测治疗效果都有很好的应用价值。

三、乙肝 -DNA 与丙肝 RNA 检测的临床应用要点

  1. 检测时机

对于乙肝患者,初次诊断时应进行乙肝 -DNA 检测,以评估病毒复制情况和疾病状态。在抗病毒治疗期间,按照治疗方案要求定期(一般每 3 - 6 个月)复查乙肝 -DNA,观察治疗效果。对于丙肝患者,一旦怀疑丙肝感染,应尽快进行丙肝 RNA 检测确诊。在抗病毒治疗过程中,严格按照规定的时间点进行检测,及时调整治疗策略。

  1. 结果解读与医患沟通

医生应准确解读乙肝 -DNA 和丙肝 RNA 检测结果,并向患者详细解释其含义。对于乙肝患者,要让患者了解病毒载量与疾病进展、治疗效果之间的关系,提高患者对长期抗病毒治疗的依从性。对于丙肝患者,告知其检测结果对于治疗方案选择和预后判断的重要性,增强患者战胜疾病的信心,积极配合治疗。

乙肝 -DNA 与丙肝 RNA 检测为我们深入了解乙肝病毒与丙肝病毒在体内的复制情况提供了有力工具。通过精准的检测、科学的结果解读以及合理的临床应用,我们能够更好地诊断、治疗和管理乙肝和丙肝患者,为降低肝炎相关疾病的发病率和死亡率,保障公众肝脏健康奠定坚实的基础。

(李清 武警河南总队医院 检验科 主管技师)


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