病理切片是用于诊断肿瘤等疾病的重要检查手段，而对病理切片染色则是用于观察切片中细胞形态的重要措施，能够帮助更详细的分析患者病变情况。病理切片染色是将组织切片展于玻片上后，利用特殊染料，染出细胞核、细胞浆，能够便于医生观察细胞形态，做出疾病的病理诊断，分析患者病情。了解病理切片的染色原理与如何染色，能够更好的完成病理切片操作，有利于提升诊断的准确性。

1 病理切片为什么需要染色？

　　病理切片是了解病理特征的重要途径，而对切片进行染色能够展示细胞形态，便于医生在显微镜下观察组织形态。任何切片在不染色情况下只能看到细胞与组织轮廓，无法诊断病理特性。因此通过手术、穿刺等方式采集到的组织样本，在经过一系列操作制作成病理切片后，需要通过染色技术侵入染色剂，让组织和细胞成分染上颜色，产生不同折射率，便于光学显微镜的观察。病理切片染色是了解组织形态，进行病理学诊断的重要条件，具有较高的应用价值。目前最常用的染色技术是苏木精-伊红染色法，利用苏木精染液的碱性特征与伊红的酸性特征对细胞组织进行染色，可以得到细胞核、细胞质的特征。除了苏木精-伊红染色法外，还有银染色、吉木萨染色等方式，可用于识别特定的细胞结构与病原体；瑞特染色法可用于血细胞染色，观察细胞内部结构特征与异常变化。病理切片染色极大的提升了组织与细胞结构的对比度，增加了细胞特征的可见性，对病理诊断而言有重要意义，应该引起充分重视。

2 病理切片如何染色？

2.1 苏木精-伊红染色法

　　苏木精-伊红染色法是病理切片中最常见的染色方法，也被称为H·E染色法，主要借助苏木素与伊红进行染色。其染色原理为，苏木素作为一种碱性染料，可以将细胞核中染色质染为蓝色；伊红作为一种酸性染料，能够将细胞质、核仁等染成红色，在经过脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固一系列操作后，可完成病理切片的染色。

2.2 H·E染色法的操作步骤

2.2.1 主要仪器与试材

　　在染色之前需要根据H·E染色法的要求准备好全套试剂、染色缸、摊片盘、搪瓷缸、盖玻片、显微镜等主要试剂与器材，并注意提前检查H·E染色全套试剂的数量、浓度等是否符合实验要求。

2.2.2 切片染色步骤

　　①脱蜡至水。对常规石蜡切片进行染色时，要先使用二甲苯Ⅰ脱蜡5—15分钟，二甲苯Ⅱ脱蜡5—15分钟，随后依次使用无水乙醇、95%酒精、80%酒精、70%酒精下行至水，每次2—3分钟。②染色。使用苏木素液染色5—7分钟，随后自来水洗5分钟；使用1%盐酸溶液进行分化30s，再进行自来水洗5分钟；使用①1%氨水返蓝5分钟，自来水②洗15—20分钟；使用95%酒精浸3分钟后，使用1%伊红酒精溶液染色1—2分钟。③脱水、透明、封固。使用95%酒精、无水酒精Ⅰ、无水酒精Ⅱ脱水处理2分钟，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ透明处理5分钟，最后使用中性树胶进行封固。

2.2.3 染色过程中的注意事项

　　①使用H·E染色，首先要确保染色试剂与工具的可靠性，提前检查苏木素染料是否新鲜，有无发生氧化；必要时需确认伊红染色液的pH值，使其pH值保持在弱酸范围内，避免由于pH值过高影响染色效果。染色切片厚度不宜过薄，否则容易在脱水过程中失去部分染料，导致染色不均，②使用苏木素进行染色时，需要注意根据切片类型、染料、温度等具体特性调整染色实践，染色后要去除多余的染料，并使用盐酸酒精进行分化，确保切片质量。分化完成后要先用流水冲洗，充分去除盐酸残留后方可进行后续操作，且实验中避免使用碱性溶液促蓝，避免影响其染色效果。①在蓝化后还应再次水洗，②清除残余后使用伊红复染，注意控制染色过程中的色差，使用显微镜等工具控制染色效果，保证核膜、染色质的清晰度。染色与复染的过程中需要注意检查切片，确保细胞核与背景的色差明显。②石蜡切片必须通过二甲苯脱蜡后方可进行染色，为保证染色的效果，在处理石蜡切片时要①烘干平板，确保组织与玻片充分粘贴，②并注意控制试验中二甲苯的使用时间与温度，保证切片脱蜡的质量。③分化是H·E染色中最为关键的环节，分化不当会导致染色不均匀，复染也无法得到有鲜明对比的色彩。因此在进行分化时，必须严格控制试剂的应用、流水冲洗时间等操作，确保切片的质量。④伊红染色完成后需要通过梯度酒精脱水的方式使其透明，否则会影响最终显示效果，梯度酒精脱水必须彻底，并且无水乙醇到不同浓度酒精的脱水效果管控需要严格。在脱水后使用二甲苯完成透明后方可进行封固，在应用二甲苯透明时，要确保时间充足。封固所使用的中性树胶不宜过多或过少，要确保能够完全覆盖病理切片。将封固好的切片平放在摊片盘后，需要置于40—50℃恒温箱15小时左右完成烘烤，完成最后的切片制作保存。

结束语：

　　病理切片染色能够为疾病诊断提供便捷条件，让医生通过显微镜直观观察病变细胞的特性，从而做出准确的病理诊断。H·E染色是病理切片染色中比较常用的技术手段，为了保证病理切片染色均匀、有效，在进行病理切片染色时，需要谨遵操作要求，管控操作条件，确保染色步骤、染色时间、染色剂用量等科学合理，避免染色过深或不足，提升病理切片质量。