在病理诊断中，经常采用HE染色法对病理切片进行染色，通过HE染色能够得到对比鲜明的组织细胞形态结构等特征，可帮助医生诊断患者的病变情况。在临床应用HE染色方法时，为了保证染色的准确性，提高病理切片质量，需要格外重视染色操作步骤的控制，详细分析染色注意事项，如此才能得到更加标准规范的病理切片，提高诊断的准确性。

1 病理诊断中的HE染色法

1.1 HE染色法概述

　　HE染色法是病理诊断中石蜡切片最常用的染色方法之一，也称苏木精-伊红染色法，利用苏木素与伊红作为染料进行染色，可以对细胞核内染色质、胞质内核酸以及细胞外基质的成分进行染色，为病理诊断提供可靠依据，提升临床诊断的准确性。

1.2 HE染色法原理

　　HE染色法中苏木素作为碱性染色剂，经过氧化后可以与铝结合生成带正电荷的蓝色色精，能够与带负电荷的脱氧核糖核酸酸根结合，使细胞核染成蓝色；伊红作为酸性红色胞浆性染料，可以通过渗透、弥散作用将细胞浆染成红色。应用HE染色方法时，细胞内如细胞核染色质、神经细胞内质网等酸性物质的嗜碱性，会被碱性染料染色；而细胞内血红蛋白、嗜酸粒细胞颗粒等嗜酸性物质，则会被酸性染料染色。由于组织和细胞中不同成分的特性，HE染色方法应用后可使相应结构呈现对应的颜色，帮助医生对病理组织详细情况进行分析。

2 HE染色操作步骤

2.1 脱蜡

　　脱蜡是HE染色过程的重要步骤，主要是将石蜡切片投入二甲苯中进行脱蜡的过程。在恒温箱中取出石蜡切片后，需立即将切片投入二甲苯中脱蜡5—10分钟，具体脱蜡时间需要根据石蜡溶解情况与室温确定，若气温高、溶解速度快，则可以适当缩短脱蜡时间，反之则需要适当延长脱蜡时间。从二甲苯中取出石蜡切片后，需要将切片移入无水乙醇中2分钟，随后分别移入90%、80%、70%酒精中各2分钟，将切片移入水中2—3分钟洗去酒精后，将其移入蒸馏水中2分钟。

2.2 染色

　　HE染色法主要应用苏木素与伊红进行染色，染色时要注意管控染色的时间，并注意观察分化情况。将切片移入苏木素中浸染8—15分钟进行染色，观察切片深染后，将切片移入水中约1—2分钟洗去苏木素与浮色。随后，将切片移入分化液中分化30秒左右，这里一般选用1%盐酸酒精作为分化液。分化时要注意观察切片的褪色情况，使其褪色至淡蓝红色，分化的主要目的是脱去细胞浆蓝色，让细胞核更加清晰，若分化不足，则会出现胞浆带蓝、胞核过染的问题；若分化过度，则可能导致胞核颜色过淡，因此需要格外重视分化操作。分化结束后，将切片移入流水中洗涤30—60分钟，让组织蓝化。随后移入伊红液中浸染，浸染时间约为2—5分钟，浸染期间若观察到着染缓慢，则可加入适量冰醋酸助染。浸染完成后，将切片移入水中洗去伊红浮液，并擦去多余染料。

2.3 脱水、透明与封固

　　将玻片上多余水分去除后，可使用80%酒精对切片进行脱水，脱水1—2分钟后，移入90%酒精中脱水2—4分钟。脱水时注意观察褪色情况，若褪色过快则需要将切片返回伊红液中复染。最后移入无水乙醇中彻底脱水4—8分钟。脱水完成后，将切片移入二甲苯Ⅰ中透明3—5分钟，随后移入二甲苯Ⅱ中透明5—10分钟。最后使用中性树胶封固，从二甲苯Ⅱ中取出切片后，需立即擦去组织外围二甲苯，随后滴上树胶，最后取出盖玻片加在封固剂上，缓慢压平。切片封固完成后，将其放入恒温箱中烤干，最后装盒。

3 HE染色过程中注意事项

　　①为了保证HE染色质量，需要严格控制操作步骤，尤其要注意脱蜡、染色等时间的控制。进行切片脱蜡时要结合室温控制脱蜡时间，避免由于室温过高、过低影响脱蜡，最后干扰染色效果。在使用二甲苯透明时，要注意观察切片状态，以切片移入后透明、片上无白色斑点为佳。②组织切片染色需要结合组织特点分析，在处理不同类别病理组织时，需要确保组织固定方式合理。另外对含升汞固定液固定的组织进行切片染色，需要提前进行脱汞处理后，方可进行后续染色。③苏木素染色时要合理把握染色时间，一般以稍深染为宜。在使用伊红液染色时要注意观察颜色，若颜色过淡，需要考虑检查试剂pH值或检查切片厚度。若苏木素染色过淡，则要检查苏木素试剂是否氧化，并分析染色时间是否不足，在优化染色条件后进行染色，确保切片染色达到预期效果。④切片染色后进行酒精脱水时，需要仔细擦拭切片，认真去除组织片周围污染涂色以及水分，确保组织脱水足够彻底。⑤在封固操作时，要注意控制操作步骤，避免封固时出现气泡、粘贴不到位以及透明度不佳等问题。封片时必须检查切片表面情况，去除杂质与污点，同时确保树胶均匀分布，避免气泡产生，保证粘贴质量。在封固时，要确保切片通过二甲苯透明，并完全去除水分，避免影响其透明度。

结束语：

　　HE染色法在病理诊断中有极高的应用价值，操作简便，对比度较高，能够制作出优良的标本。在实际运用HE染色法时，除了要注意病理切片的选材与固定等操作，还要对HE染色的脱蜡、染色、脱水、透明等过程进行细节控制，确保病理组织染色质量达标，在实验中要注意可能导致染色浅或失真等问题的意外情况，提前做好试剂与工具的检查，规范操作染色步骤，从而得到品质优良的病理切片。