结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤,在我国,结直肠癌发病率的上升趋势明显。当病友拿到病理检查报告时,有病友经常问及报告上描述的内容代表什么意思?这些检测是否真的有必要?结直肠癌的病理检查报告一般都会包括免疫组化内容,大家可以简单理解为通过免疫组化,能够探测肿瘤组织中某些蛋白分子的表达水平。对于结直肠癌而言,可以重点关注错配修复(MMR)蛋白:MLH1,MSH2,MSH6 和 PMS2四项免疫组化,下面重点谈谈结直肠癌错配修复(MMR)蛋白的微卫星不稳定病理检查:
错配修复(MMR)蛋白,免疫组化检测4个常见MMR蛋白(MLH1、MSH2、MSH6和PMS2)的表达。其中任何1个蛋白表达缺失便为错配修复功能缺陷(dMMR),所有4个蛋白表达均阳性为错配修复功能完整(pMMR)基因检测还可检测微卫星不稳定(MSI),一般是检测5个微卫星点(BAT25、BAT26、D5S346、D2S123和D17S250)。判断标准为三级:所有5个位点均稳定为微卫星稳定(MSS),一个位点不稳定为微卫星低度不稳定(MSI-L),2个及2个以上位点不稳定为微卫星高度不稳定(MSI-H)。
染色体不稳定途径和微卫星不稳定途径是结直肠癌发生的两条主要分子途径。MSI结直肠癌不仅在好发部位、常见组织形态上与染色体不稳定结直肠癌存在差异,而且在临床预后、治疗、遗传性肿瘤筛查方案的选择上也有所不同,微卫星不稳定与结直肠癌的关系最为密切,且这方面已有广泛研究。了解MSI,首先看看MSI的系统成员系统成员包括 MLH1,MSH2,MSH6 和 PMS2 等错配修复蛋白。 英文名叫做MMR,MMR是人体细胞中存在的一种“安全保障系统”,由一系列能特异性识别、切除并修复DNA错配碱基的分子组成,具有增强DNA复制忠实性,维持基因稳定性,降低自发突变的功能,从而保证DNA复制高度保真性。约15%的结直肠癌具有微卫星不稳定,其中80%为散发性,20%发生于Lynch综合征情况下。整个基因组有超过 100000 个被叫作微卫星的短串联重复序列区域,复制过程中易于滑动出现错误,因此非常依赖于 MMR 系统修复。
MLH1,MSH2,MSH6 和 PMS2蛋白出现异常时,引起 MMR 缺陷(dMMR),不能发现和修改微卫星复制错误而造成弥漫的微卫星不稳定(MSI)。虽然大部分微卫星位于非编码区,但是错置的突变会导致移码突变,引起肿瘤相关基因出现异常,进而诱导癌症发生。
新发结肠癌中,微卫星不稳定检测已成为常规,NCCN也建议所有新确诊的结肠癌患者都进行这一检测。大部分实验室是通过免疫组化检测错配修复蛋白来启动这一检测。免疫组化结果异常则提示错配修复缺陷,这种情况一般会导致恶性肿瘤中的微卫星不稳定、超突变。最常见的异常着色模式是MLH1和PMS2着色同时缺失。这种情况可见于部分综合征病例中,但最常见于因MLH1启动子超甲基化所致的散发性病例。其他异常表达模式有:MSH2和MSH6的同时缺失,仅PMS2的缺失,仅MSH6的缺失;这些情况几乎总是提示综合征相关恶性肿瘤。
错配修复状态在结肠癌中具有重要意义。区分MSI结直肠癌的临床意义包括以下四个方面。
目前,MSI的临床价值体现在多个方面:
1.辅助筛查林奇综合征: Lynch综合征是常染色体显性遗传疾病,是最为常见的遗传性结直肠癌综合征,患结直肠癌的风险约为70%-80%,其特点是具患多种癌症的风险——其中子宫内膜癌的风险为30%-60%,卵巢癌的风险为9%-12%,胃癌的风险是11%-19%。如果术前能明确Lynch综合征的诊断,外科医师有可能采取更为广泛的切除术式。由于Lynch综合征与大家熟知的家族性腺瘤性息肉病不同,除非整个家族的结直肠癌发病率明显上升,否则很难发现单个个体携带者。因此,从MSI-H结直肠癌中筛选出可疑的Lynch综合征患者,不仅有利于患者本人的肿瘤治疗和预防筛查策略的制定,而且有利于发现Lynch综合征家系,为患者家族成员的肿瘤预防提供重要信息。所有结直肠癌患者应采用MSI或MMR蛋白检测进行林奇综合征的筛查;
2.判断预后:MSI-H型的患者临床进展缓慢,预后较好;临床研究发现,在Ⅱ期结直肠癌中,MSI-H结直肠癌的比例(22%)高于Ⅲ期结直肠癌(12%),而在Ⅳ期肿瘤中仅占3. 5%,提示MSI-H结直肠癌发生转移的风险较低。特别是在Ⅱ期结直肠癌患者中,MSI状态是提示预后的独立预测因子,MSI-H肿瘤预后好于MSS肿瘤。Ⅱ期结直肠癌复发的高危因素包括:肿瘤组织学类型为低分化癌、有脉管/神经侵犯、淋巴结检出数量不足12个、发生梗阻或穿孔以及切缘阳性,但如肿瘤为MSI-H型,则低分化不属高危因素。
3.指导5-FU辅助化疗:II期的MSI-H型结直肠癌患者无法从5-FU化疗中获益;研究发现,MSI-H结直肠癌对5-氟尿嘧啶和顺铂等化疗药物不敏感,而对伊立替康等化疗药物敏感,同时MSI结直肠癌对放疗比较敏感。美国国立综合癌症网络( NCCN)的结直肠癌临床实践指南明确指出,对MSI-H结直肠癌不宜采用5-氟尿嘧啶和铂类为主的治疗方案。
4.指导免疫治疗:MSI-H或dMMR型的肿瘤患者在多个实体瘤中被证实免疫治疗疗效显著。
不少研究表明,MSI不仅仅只局限于结直肠癌患者中,同时普遍存在于其它癌症类型患者中,其中包括子宫内膜癌,胃癌,肝细胞癌,黑色素瘤等癌细胞中,我国结直肠发病率持续上升,但对MSI肿瘤和Lynch综合征进行筛查的观念尚待普及。分子机制的研究进展和检测手段的进步,特别是免疫组织化学方法检查错配修复蛋白缺失的被认可和普及,使常规检测肿瘤MSI状态变得简便易行。
(张海燕 南阳医学高等专科学校第一附属医院 病理科 副主任医师)