宫颈刮片巴氏是临床上用于检测宫颈癌细胞是否存在异常的一种筛查方法，在宫颈癌及癌前病变检查中发挥着重要作用。此种检查方法不仅操作简单且结果可靠性高，同时成本较低，因此在临床妇科检查中十分常见。为保证宫颈刮片巴氏染色结果的准确性，就需要强调操作流程的规范性与专业性，排除人为因素造成的影响。

1、什么是宫颈刮片巴氏染色

宫颈刮片巴氏染色是利用一次性宫颈刮板取宫颈脱落细胞均匀涂抹在玻璃片上，再进行巴氏染色，最后通过显微镜来观察，确认宫颈是否有炎症或癌变情况存在。巴氏染色可以分为Ⅴ级，Ⅰ级表示正常细胞，Ⅱ级表示炎症细胞，Ⅲ级表示可疑细胞，Ⅳ级表示癌细胞有待排查，Ⅴ表示确诊癌细胞。当通过巴氏染色确认存在级以上病变的情况下，便需要采取相应的治疗措施。宫颈刮片巴氏染色早于70~80年代就已经被广泛用于妇科检查，只需要通过简单的宫颈抹片，便可以观察和确认子宫颈细胞发生的细小及早期变化，是一种有效的子宫颈癌早期筛查方法，在临床上发挥着巨大的作用。

2、宫颈刮片检查

    宫颈刮片检查操作比较简单，将宫颈外口充分暴露后，使用刮片于宫颈外口出旋转360°，轻轻刮取适量粘膜与分泌物，并将其均匀涂抹在设置好编号的玻璃片上，马上固定于95%的乙醇内15min，最后进行巴氏染色。

    为保证取样具有代表性，要求患者在宫颈刮片前24h内应避免性生活，且刮片前24~48h内不要使用置入阴道的栓剂，也不要冲洗阴道，并避免接受阴道内诊检查。另外，如果宫颈刮片检查之前患者已经确诊存在炎症，需要接受治疗痊愈后在接受刮片检查，以免因为白细胞与炎性细胞的存在而影响最终检查结果的准确性。另外，需要在非月经期接受检查，且白带过多的情况下，可以通过无菌木棉将黏液轻轻刮净后在利用刮板刮取标本，过程要控制好力度，避免对组织造成损伤。

3、宫颈刮片巴氏染色方法

    3.1固定

宫颈刮片完成后需要在标本新鲜且湿润的状态下，立即放置到95%乙醇内固定至少15min，不得长时间置于空气环境中，预防标本细胞发生变形、皱缩或干燥。固定是宫颈刮片巴氏染色非常重要的一步，对保证检查结果准确性意义重大。使用95%乙醇固定便是最为常见的“湿固定”，乙醇作为一种脱水剂，可以很好的预防细胞内酶捋蛋白质的分解，同时促使细胞内蛋白质、脂肪及糖类的凝固，确保与组织生活相仿的成分不会受到太大影响，更有利于巴氏染色时细胞核的着色，为高准确度检查提供支持。固定过程中所使用的固定液有严格要求，尤其是已经使用过的固定液均需要进行过滤，并使用酒精相对密度计来测定其浓度，对于浓度不足90%的不得继续使用。另外还有一点我们需要给予重视，即部分需要邮寄的标本，需要先利用95%乙醇固定15min后取出，然后继续向制片滴加适量的甘油，最后装入到密封的小盒子内。待实验室接收到标本之后，将其取出直接置入95%乙醇内，确保所有甘油溶去后，才可后续的染色操作。

    3.2核染色

    实验室多采用苏木素浸液染色，浸染时间常规保持在3~5min，实际操作中会根据外界气温和染料的情况来灵活调整。如夏季环境温度更高，或者使用久置的苏木素染液时，因为更容易染色因此浸染时间可适当缩短，相反冬季与新配置的染液，则需要延长浸染时间。现在核染色常用的方法主要有两种：

    第一种为过染法，对刮片进行有目的的深染，在盐酸酸化反映下达到预期的染色效果。盐酸酸化反应能够去除宫颈细胞胞浆内黏附的多余苏木素染料，因此胞浆的染色会更加的清晰和鲜艳，对于黏液较多的宫颈刮片有更好的染色效果。

    第二种为淡染法，不对标本进行盐酸酸化反应，直接通过控制染色时间来达到所需的染色目标。在使用此种方法染色时，我们要将重点放在胞浆内少量苏木素对EA染色效果的影响上，因此只适用于黏液较少的标本。苏木素染液来进行核染色时，要做到每日过滤，去除苏木素结晶对染色效果的影响。

    3.3胞浆染色

    宫颈刮片巴氏染色中一般将胞浆染色成为OG-EA染色，由橘黄G（OG）和EA两部分染色组成。其中，橘黄G作为一种小分子染料，在作用于胞浆时所花费的时间更短，作用效果可以更加迅速的显现出来，通常只需要花费1~2min，对于宫颈和阴道上皮中非正常角化细胞以及角化型鳞癌细胞的胞浆均有显著的染色效果，都可以将其染色成鲜艳的橘黄色。

    3.4透明

    透明是巴氏染色的最后一个步骤，目的是避免细胞色度与细胞重叠对显微镜观察视野的影响。通常会选择二甲苯作为透明溶剂，其折射率与载玻片折射率相近。操作时要保证所用二甲苯溶液未发生变化，如出现浑浊或颜色等，均需要更换溶液操作。

    3.5封固

    为了能够保证宫颈刮片巴氏染色检查结果的可靠性与准确性，需要及时对制片进行封固处理，以便很好的来预防空气干燥，延长制片存放时间，避免制片褪色。最为常用的便是利用24mm×50mm或24mm×60mm的盖玻片，通过二甲苯调配的中性树胶来进行封固。

    巴氏染色工艺并不复杂，但是对细节要求比较严格，全过程均需要做好详细记录，包括染液用量、染液更换时间、染液染的标准数量等，便于及时更换染液。并且还需要通过显微镜观察染色结果，判断各染色步骤是否标准，以免出现核染色过深或过浅的现象，保证能够在宫颈癌早期筛查诊断中发挥出有效作用。